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熒光原位雜交(FISH)濾光片

熒光原位雜交(FISH)濾光片

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  • 更新時(shí)間:2024-04-11
  • 產(chǎn)品介紹:熒光原位雜交(FISH)
    熒光原位雜交 (Fluorescence In Situ Hybridization, FISH) 是指利用熒光染料標(biāo)記的,已知序列的單鏈核酸作為探針,通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,與待檢樣品中核酸進(jìn)行特異性結(jié)合,然后通過(guò)觀察熒光信號(hào),從而對(duì)樣品中待檢核酸進(jìn)行定性,定量及定位分析。FISH 有快速,信號(hào)強(qiáng),特異性高以及可以多重染色等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前診斷,基因組結(jié)構(gòu)分析等領(lǐng)域。
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產(chǎn)品介紹

品牌其他品牌應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,電子,綜合

熒光原位雜交(FISH)

熒光原位雜交 (Fluorescence In Situ Hybridization, FISH) 是指利用熒光染料標(biāo)記的,已知序列的單鏈核酸作為探針,通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,與待檢樣品中核酸進(jìn)行特異性結(jié)合,然后通過(guò)觀察熒光信號(hào),從而對(duì)樣品中待檢核酸進(jìn)行定性,定量及定位分析。FISH 具有快速,信號(hào)強(qiáng),特異性高以及可以多重染色等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前診斷,基因組結(jié)構(gòu)分析等領(lǐng)域。

影響FISH 結(jié)果的因素有很多,包括樣品準(zhǔn)備和處理,顯微鏡,光源,熒光探針以及濾光片。FISH 通?;跓晒怙@微鏡來(lái)觀測(cè)信號(hào),所用濾光片包括激發(fā)片,二向色鏡和發(fā)射片三種。其工作原理如下圖所示:

圖片

l                      激發(fā)片:選擇透過(guò)光源某部分波段的光,用來(lái)激發(fā)熒光探針;

l                      二向色鏡:反射光源的光至樣品,透過(guò)產(chǎn)生的熒光并反射激發(fā)光的散射光;

l                      發(fā)射片:選擇透過(guò)熒光的某部分波段的光至檢測(cè)器或人眼,并可以阻擋掉激發(fā)光的雜散光。

FISH 實(shí)驗(yàn)中,濾光片帶寬的大小會(huì)對(duì) FISH 圖像的對(duì)比度產(chǎn)生重要的影響。增加帶寬會(huì)提高激發(fā)和接收效率,使接收的信號(hào)增強(qiáng)。但實(shí)際接收的信號(hào)中同時(shí)包含了探針的熒光信號(hào)和樣品的背底噪音,帶寬的增加會(huì)同時(shí)增加這兩者的強(qiáng)度。帶寬減小,雖然可以降低背底噪音的強(qiáng)度,但熒光信號(hào)也會(huì)隨之減弱 。所以對(duì)于對(duì)比度要求很高的FISH 實(shí)驗(yàn),針對(duì)于每種具體的染料,都會(huì)存在一個(gè)*的帶寬,使 FISH 圖像能夠達(dá)到*的對(duì)比度。FISH 濾光片的帶寬都是根據(jù)常用的 FISH 染料做過(guò)優(yōu)化,可以為用戶的 FISH 實(shí)驗(yàn)提供*的圖像對(duì)比度。

圖片

"B" 的信號(hào)比"A" 91%, 但是“B" 的噪音比“A" 226%。“A"具有更好的對(duì)比度!

圖片

FISH 濾光片組具有以下特點(diǎn) :

l                      高透過(guò)率、高截止深度和高光譜陡度;

l                      保證足夠亮度的同時(shí),提供*的圖像對(duì)比度;

l                      消除串色的影響;

a. 消除Gold Aqua 串色到Green 通道;

b. 消除Gold Orange 串色到Red 通道;

l                      對(duì)多波段濾光片組中的DAPI 通道進(jìn)行特殊處理,避免DAPI 信號(hào)過(guò)強(qiáng)而將其他通道信號(hào)掩蓋;

l                      多色圖像疊加零漂移;

l                      磁控濺射鍍膜,終身質(zhì)保。

ET 系列 - FISH 單波段帶通濾光片組

濾光片組

激發(fā)片

CWL/FWHM

二向色鏡

50% cut-on

發(fā)射片

CWL/FWHM

FISH 探針

備注

49000

350/50

400

460/50

DAPI

49028

395/25

425

460/50

DAPI

用于 395 nm 光源

49301

405/10

425

460/36

Blue

49302

436/20

455

480/30

Aqua

49303

495/25

515

537/29

Green

用于有 Aqua,無(wú) Gold 時(shí)

49308

485/25

505

525/30

Green

用于無(wú) Aqua,有 Gold 時(shí)

49312

490/20

505

525/20

Green

用于有 Aqua,有 Gold 時(shí)

49313

490/20

505

520/20

Green

Ventanta FISH 或免疫熒光

49304

546/10

556

572/23

Gold

49305

546/22

565

590/33

Orange

用于無(wú) Red 時(shí)

49309

539/21

556

576/31

Oange

用于有 Red 時(shí)

49306

580/25

600

625/30

Red

用于無(wú) Gold,無(wú) Orange 時(shí)

49310

592/21

610

630/30

Red

用于有 Gold,無(wú) Orange 時(shí)

49311

599/13

612

632/28

Red

用于有 Orange 時(shí)

49307

630/20

647

667/30

Far Red

49009

640/30

660

690/50

Far Red

ET 系列 - FISH 多波段濾光片組

DAPI 是一種能夠與DNA雙鏈特異性結(jié)合的有機(jī)熒光染料。在 FISH 實(shí)驗(yàn)中,DAPI 主要用來(lái)對(duì)整個(gè)細(xì)胞核進(jìn)行染色成像,這就導(dǎo)致了 DAPI 的濃度要遠(yuǎn)高于其他 FISH 探針的濃度。而在有些 FISH 實(shí)驗(yàn)流程中,DAPI 是在最后一步進(jìn)行染色,染色之后也沒(méi)有清洗的步驟。

在使用多波段濾光片進(jìn)行多色 FISH 實(shí)驗(yàn)中,為了避免DAPI 的信號(hào)將其他 FISH 探針的信號(hào)掩蓋,在 多波段濾光片組中,會(huì)刻意降低激發(fā)片在 DAPI 處的透過(guò)率,從保證 DAPI 的信號(hào)不至于過(guò)高(見(jiàn)下圖)。

DAPI Aqua 發(fā)射峰高度重疊,通常情況下同時(shí)做兩種探針的成像會(huì)很困難,因?yàn)榇罅康?/span> DAPI 信號(hào)會(huì)將 Aqua 信號(hào)掩蓋掉。

69014 濾光片組,通過(guò)降低 DAPI 的激發(fā)效率,能夠?qū)崿F(xiàn)DAPI,Aqua,Green Orange 四色的同時(shí)觀察。 DAPI Aqua 采用不同的激發(fā)波段,但共享同一個(gè)接收通道(見(jiàn)下圖)。

圖片圖片

ET 系列 - FISH 多波段濾光片組

濾光片組

FISH 探針

DAPI

Aqua

Green

Gold

Orange

Red

Far Red

59001v2

59002v2

59003v2

59010

59011

59012

59033

69008

69011

69013v2

69014

69015

89084v

8908

1. 為保證 Green Orange 強(qiáng)度接近,59011 適用于汞燈和鹵素?zé)艄庠矗?/span>59012 適用于 LED 光源;

2. 含一個(gè)雙波段激發(fā)片,用于同時(shí)激發(fā) Green Orange;一個(gè)三波段激發(fā)片,用于同時(shí)激發(fā) DAPI,Green Orange;三個(gè)單波段激發(fā)片,用于 分別激發(fā) DAPI,Green Orange;

3. 含一個(gè)雙波段激發(fā)片,用于同時(shí)激發(fā) Green Red;一個(gè)三波段激發(fā)片,用于同時(shí)激發(fā) DAPI,Green Red;三個(gè)單波段激發(fā)片,用于分別 激發(fā) DAPIGreen Red。




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